Biologie Question #3025
Rafael Sumalinog (Genre: mâle, Àge: 16 années) de Edmonton sur 6 novembre 2005 demande:
Quelle est analyse d'immunofluorescence, quelles matières premières est employée, et combien de temps il prend pour exécuter ? Est-ce que ce semblable avec l'analyse et l'analyse cytometric d'immunoblot est en termes de déterminer comment un produit chimique affecte une cellule (par exemple motilité et morphologie de neutralisation) ? En outre, combien de temps l'analyse et l'analyse cytometric d'immunoblot prendraient-elles, et pour quoi sont-elles ? Et en conclusion, savez-vous si ces (ou) analyses semblables peuvent être faites à Edmonton ?
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La réponse
L'immunofluorescence est très semblable à l'immunoblot - mais le grand changement est que nous le faisons habituellement sur le tissu ou les cellules plutôt que les protéines fixe qui ont été épongées sur un morceau de papier. Cytometric implique le « mouvement » à moi, ainsi aux analyses fonctionnelles d'encompases probables de cette limite sur des cellules quand ils sont vivants, à moins que vous parliez de l'écoulement cytometry - dans ce qui encore, la manière que nous rendons des choses évidentes est très très semblable et peut être fait sur les cellules de phase ou fixes. Utilisations cytometry d'écoulement un instrument très cher pour la détection et les travaux sur des cellules.
Voyons pourquoi…
Comprendre d'abord est que la partie immuno de quelconque d'entre ces analyses est le produit d'une immuno-réaction à quelque chose de étranger. Pour employer ces produits, des anticorps, nous devrions avoir la protéine ou l'autre molécule en forme pure, alors nous l'injecterions dans un animal des autres spieces. Par exemple, nous voulons examiner la bêta-actine en cellules humaines, ainsi nous l'injecterions dans une souris, ou rat, ou chèvre. Disons la souris. La souris préparera un bêta anticorps anti-humain d'actine. Nous pouvons épurer cela du sang de la souris (les compagnies entières existent que vous pouvez acheter ces derniers de !). Une autre compagnie prendra des anticorps de souris et les injectera dans une chèvre. La chèvre préparera un anticorps d'anti-souris qui liera l'anticorps de souris. Maintenant, parce que nous pour voir l'anticorps fait dans la chèvre, nous attacherons une étiquette à elle. Les étiquettes peuvent être fluorescentes, une enzyme, ou même une perle.
Faire maintenant l'essai…
Prendre les cellules humaines et les fixer avec de divers agents tels que le méthanol ou le formaldeheyde (10 minutes). Washington Mettre quelques sérums de souris ou de chèvre sur les cellules pour bloquer des protéines collant où elles ne sont pas supposées (heure 30 min-1). Washington Mettre dessus l'anti-bêta anticorps d'actine que nous avons fait chez la souris (30-60min). Washington Mettre dessus l'anticorps d'anti-souris que nous avons fait dans la chèvre qui a l'étiquette là-dessus (30-60 minutes). Washington. Si c'étaient un morceau de tissu sur une glissière, nous la regarderions à l'aide d'un microscope fluorescent. Si nous faisions l'écoulement cytometry, nous le prendrions à la machine et ferions la courir à quelqu'un pour nous. Si c'étaient un immunoblot, nous avions l'habitude une tache pour la voir.
Voici une image de la façon dont l'immunofluorescence fonctionne et une sur Western blotting, une forme d'immunoblot.
Toutes ces analyses sont probablement disponibles à Edmonton à l'université d'Alberta. Si vous pensez le projet d'école, je ne irais pas beaucoup plus loin de pair avec l'écoulement cytometry car il est très cher pour la plupart des applications et probablement ne te serais pas offert. Les deux autres analyses sont communes et seront seulement aussi chères que qui premier anticorps de souris. Certaines de ces derniers ne sont pas bon marché, mais 1ML sera raisonnable (comme $200) et fera des milliers d'analyses par rapport au même prix de 1 essai cytometry d'écoulement. Peut-être vous devriez trouver quelqu'un qui étudie votre protéine d'intérêt et voir si elles ont un certain anticorps déjà ! Je vérifierais les pages Web du corps enseignant chez UofA pour trouver les personnes concernées. Alternativement, si vous ne les trouvez pas facilement, le contact quelqu'un à l'université d'Alberta dépassent.
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